Détails
Purification d’ARN viral
Le Kit ARN Viral FastGene® utilise une méthode de purification d’ARN par une membrane en silice, optimisée pour l’ARN viral. La procédure a été conçue pour être simple et facile à réaliser. La performance de purification est remarquable, et comparable à celle des compétiteurs majeurs Q et M.
ARN viral de la plus haute qualité
Le Kit ARN Viral FastGene® fourni de l’ARN viral de qualité supérieure. La qualité de l’ARN est mesurée en déterminant un RIN, Numéro d’Intégrité de l’ARN (RNA Integrity Number). Selon les instructions du fabricant, un RIN donne une idée de l’intégrité de l’ARN. De l’ARN de haute qualité aura un RIN au-dessus de 8, 10 étant la valeur maximale. Le Kit ARN Viral FastGene® vous donne de l’ARN purifié avec une qualité comparable aux leaders du marché. L’ARN est donc dans un état idéal pour des expériences suivantes, comme la réverse transcription ou la qPCR.
Types d’échantillons – Fluides sans cellules et plus…
- Fluides sans cellules
- Plasma et sérum
- Urine
- Échantillons infectés par un virus
- Surnageant de culture cellulaire
Compatible avec les Kits de Diagnostic COVID
Le Kit ARN Viral FastGene® fourni de l’ARN avec une qualité qui lui permet d’être utilisé avec des kits de diagnostics disponibles dans le commerce, pour la détection de virus.
Procédure vraiment rapide
Le Kit ARN Viral FastGene® contient un protocole très facile et rapide à exécuter. Pour le protocole complet, téléchargez le Manuel ou cliquez sur Protocole.
Protocole
Procédure pour purifier de l’ARN viral
Lyse et optimisation de liaison
1) Transférer jusqu’à 300 µL d’échantillon (milieu de stockage d’écouvillonnage, fluide acellulaire, surnageant de milieu de culture, plasma, sérum, urine) dans un microtube de 1,5 mL.
2) Ajouter 500 µL de tampon ViL (Tampon de Lyse) au tube et lyser les échantillons au vortex pendant 15 secondes.
- Vérifier que le tampon ViL n’ai pas précipité. Le précipité peut être dissous par une incubation à 37 °C ou au-dessus.
- Le volume de tampon ViL peut être ajusté par rapport au volume d’échantillon.
- Pour une lyse efficace, il est nécessaire que la solution d”échantillon et de tampon ViL soit parfaitement mélangée.
3) Incuber le lysat pendant 10 minutes à température ambiante (15 – 25 °C).
- Après cette étape, centrifuger brièvement le tube pour retirer les gouttes de l’intérieur du capuchon.
4) Ajouter 700 µL de tampon ViB (Tampon de Binding) au lysat et mélanger soigneusement par inversion ou par vortex.
- Le volume du tampon ViB peut être ajusté par rapport au volume de lysat.
Ne pas centrifuger !
5) Transférer jusqu’à 750 µL de mélange dans la Colonne FastGene® Vi.
6) Centrifuger ≥ 10 000 x g pendant 30 secondes à température ambiante.
- Jeter le liquide et réinserer à nouveau la Colonne FastGene® Vi dans le même tube.
7) Pour les volumes plus gros, répéter l’étape 5 ~ 6 avec le lysat restant.
- Jeter le liquide et réinserer à nouveau la Colonne FastGene® Vi dans le même tube.
Lavage de la membrane de silice
8) Ajouter 500 µL de tampon ViW1 (Tampon Wash) à la Colonne FastGene® Vi.
9) Centrifuger ≥ 10 000 x g pendant 30 secondes à température ambiante.
- Jeter le liquide et réinserer à nouveau la Colonne FastGene® Vi dans le même tube.
10) Ajouter 500 µL de tampon ViW2 (Tampon Wash 2) à la Colonne FastGene® Vi.
11) Centrifuger ≥ 10 000 x g pendant 30 secondes à température ambiante.
- Jeter le liquide et réinserer à nouveau la Colonne FastGene® Vi dans le même tube.
12) Centrifuger ≥ 10 000 x g pendant 1 minute de plus à température ambiante pour enlever le tampon Wash résiduel. Transférer la Colonne FastGene® Vi dans un nouveau microtube de 1,5 mL (fourni).
- Du tampon ViW2 résiduel dans l’élution peut causer des problèmes pour les expériences ultérieures. Certains rotors de centrifugeuses vibrent en décélérant, mettant en contact le flow through contenant le Tampon ViW2, et la colonne FastGene®. De plus, il est important de sécher la membrane, car des résidus d’éthanol peuvent également interférer avec la suite de vos expériences.
Elution
13) Ajouter 30 ~ 50 µL d’eau sans nucléase (fournie) au centre de la membrane de la Colonne FastGene ® Vi. Incuber à température ambiante pendant 1 minute.
14) Centrifuger ≥ 10,000 x g pendant 1 minute à température ambiante.
- L’ARN purifié peut être stocké à 4 °C pour des analyses immédiates ou à -70 °C pour un stockage à long terme. Dans ces conditions, l’ARN viral est stable jusqu’à un an.
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