ReadyMix Scriptase II ADNc OdT 5X FastGene

Détails

Ready Mix

Le ReadyMix Scriptase II 5X FastGene^® est une enzyme génétiquement modifiée avec une activité RNase H réduite. Elle est envoyée prête à l’emploi avec tous les ingrédients nécessaires pour effectuer une transcription inverse.

Enzymes d’ingénierie

Les transcriptases inverses génétiquement modifiées permettent la synthèse d’ADNc à partir de très faibles quantités d’ARN. Des mutations sont insérées dans le domaine RNase H de la transcriptase inverse MuLV. Par conséquent, en ne dégradant pas l’ARN pendant la synthèse du premier brin, un rendement plus élevé en ADNc entier est obtenu. De plus, une stabilité thermique plus élevée augmente la robustesse de l’enzyme.

La Scriptase II FastGene^® est exactement l’une de ces enzymes d’ingénierie. Avec sa mutation dans le domaine RNase H et sa stabilité thermique supérieure, elle constitue le choix optimal pour des utilisations plus complexes, telles que des RT-qPCR et du NGS.

Activité RNase H plus faible pour des ADNc plus longs

La Scriptase II FastGene^® a un domaine RNase H modifié. L’ARN n’est donc pas dégradé et sert de matrice pour des ADNc plus longs, ce qui permet d’obtenir une taille de fragments pouvant atteindre 12 kpb.

Enzymes d’ingénierie – optimisées pour la qPCR

La Scriptase II FastGene^® fournit des matrices ADNc de qualité supérieure pour ses utilisations en aval, par exemple pour de la qPCR et du NGS. L’ADNc entier obtenu donne une image complète du gène et permet de mettre en évidence des modifications, comme des variants d’épissage.

Composition

Prêt à l’emploi

ReadyMix Scriptase II ADNc OdT 5X FastGene^® est livré avec tous les ingrédients nécessaires pour effectuer une transcription inverse :

• Scriptase II FastGene^®
• Tampon Scriptase II 5x FastGene^®
• Mélange de dNTPs
• Inhibiteur de RNase
• Hexamères aléatoires
• Protéine auxiliaire (helper protein)
• Oligo dTs

Protocole

1. Mélangez le ReadyMix avec la matrice ARN en suivant la configuration suivante :

2. Incuber à 25 °C pendant 10 minutes.

3. Incuber à 42 °C pendant 60 minutes.

• Note : Le temps d’incubation recommandé peut être réduit de 5 minutes, en fonction de la quantité et de la taille du produit. Télécharger ici notre Note Technique montrant la performance avec un temps d’incubation plus court (jusqu’à 5 min).

4. Inactiver la Scriptase II FastGene^® en incubant à 85 °C pendant 5 min.

5. Stocker l’ADNc à -20 °C ou l’utiliser pour des utilisations ultérieures.

Documents

Manuel

LS65_Scriptase II – Ready Mix_Manual

Note Technique

Very fast reverse transcription reactions (5min)

Notes d’Utilisations

Cloning of isoflavone biosynthesis related enzyme using RNA extracted from soybene

Comparative study of reverse transcriptase reaction using RNA extracted from zebrafish fertilized eggs

Reverse transcriptase reaction for quantitative expression analysis using RNA extracted from mesenteric adipose rat tissue

Comparative study of RT-reaction by using RNA extracted from mouse lymph node

Comparative study of reverse transcriptase reaction using RNA extracted from peritoneal cells of sterile peritonitis model mouse

Oligo dT verification of FastGene® ScriptaseⅡ cDNA 5x ReadyMix OdT

MSDS

LS65_FG Scriptase II cDNA 5x Ready Mix OdT_MSDS

FAQ

Quelle est la température recommandée pour le ReadyMix ?

Le ReadyMix Scriptase II ne peut être utilisé qu’à 42 °C, car il contient une protéine auxiliaire (helper protein).

Est-ce que je peux utiliser le ReadyMix Scriptase II pendant 15 min avec une grosse quantité d’ARN (2,5 µg / 20 µL) ?

Nous recommandons un maximum d’1 µg. La raison : les gènes très exprimés seront proportionnellement surreprésentés dans une concentration aussi élevée. Signifiant qu’en 15 min, les chances de trouver un ARNm très concentré sont plus hautes que pour les ARNm à faible concentration. Avec 1 µg, la quantité d’enzyme par ARNm sera bien plus haute, garantissant la RT totale de chaque ARNm.

Puis-je utiliser LS65 avec de l’ARN dans une solution contenant de la DNase I inactivée par de l’EDTA et de la chaleur ?

La chaleur et l’EDTA n’inactivent pas la DNase I à 100 %. Pour éviter l’ADN génomique, nous recommandons d’utiliser le Kit ARN Premium (FG-81#). Dans ce cas, l’EDTA va bloquer l’activité de la Scriptase II (puisque l’EDTA chélate les ions). Pour aider la Scriptase II, nous recommandons d’ajouter du MgCl₂ pour compenser l’effet de l’EDTA.

L’EDTA chélate 2 molécules de Mg²⁺. Il vous faut simplement calculer la quantité de Mg²⁺ qui doit être ajoutée à la solution de réaction.

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