Détails
Stockage à long terme des cellules
La cryoconservation des cellules de mammifère est très courante en recherche en biologie. La peur de perdre une lignée cellulaire en raison d’une contamination ou d’une défaillance d’un incubateur est souvent la raison pour laquelle l’archivage des cellules est une priorité absolue après la réception ou la création d’une nouvelle lignée cellulaire. Une fois transférées du milieu de croissance au milieu de congélation, les cellules sont généralement congelées à une vitesse contrôlée et stockées dans de la vapeur d’azote liquide ou à -130 ° C dans un congélateur. Bien que la congélation d’une lignée cellulaire soit une procédure courante, des problèmes se posent lorsque des congélateurs appropriés ne sont pas disponibles ou en cas d’introduction d’aléas favorisés par la présence de sérum, de rinçages abusifs ou d’algorithmes de congélation compliqués.
Gagnez du temps tout en sauvant vos cellules
Le milieu de congélation de cellules BambankerTM permet la cryoconservation des cellules à -80 °C (ou dans de l’azote liquide), évitant ainsi le recours à un congélateur très basse température coûteux, et évitant des protocoles de congélation longs et compliqués. Il suffit de (1) récolter les cellules, (2) aspirer le milieu de culture, (3) resuspendre les cellules dans le milieu de congélation BambankerTM (4), transférer dans un tube cryogénique et (5) conserver à -80 °C. Aucune congélation programmée ou séquentielle n’est requise ! BambankerTM est un milieu de cryoconservation sans sérum, prêt à l’emploi, pouvant être conservé au réfrigérateur pendant deux ans. Des flacons pratiques de 20 ml sont disponibles, ce qui rend BambankerTM idéal pour une utilisation par personne dans votre laboratoire. BambankerTM est aujourd’hui le leader du marché au Japon et est cité dans de nombreuses références scientifiques internationales.
Le sérum est source d’aléas dans la conservation à long terme
Les produits BambankerTM sont fabriqués sans sérum. Les milieux de cryoconservation contenant du sérum présentent l’inconvénient de ne pas avoir une composition connue et entrainent des fluctuations sur le taux de récupération des cellules. La reproductibilité des expériences avec des cellules congelées dans un milieu contenant du sérum pourrait être affectée par sa composition (concentration variable de protéines et autres molécules biologiques dans chaque lot de sérum). Utiliser de tels milieux peut donc être à l’origine de problèmes lors de la décongélation des cellules. La composition de BambankerTM étant définie avec précision, vous pouvez donc être sûr que les cellules stockées à des moments différents se comporteront et se rétabliront de la même manière.
Universel – même pour la conservation des cellules souches
Les lignées cellulaires les plus courantes peuvent être préservées avec un grand nombre de cellules intactes après décongélation. Les taux de récupération des cellules même sensibles sont beaucoup plus élevés par rapport aux milieux ordinaires. Par exemple, la banque de cellules JCRB stocke avec beaucoup de succès plus de 1 400 lignées cellulaires différentes avec BambankerTM.
Flexible
Il existe quatre versions différentes de Bambanker™.
- Tous les types de Bambanker™ sont exempts de sérum bovin fœtal (FBS) et ont une composition définie et constante.
- Ils ne contiennent pas non plus d’ingrédients antibiotiques ou antifongiques.
Les quatre différents types de Bambanker™ sont recommandés en fonction de vos besoins spécifiques:
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Bambanker™ (universal, pour toutes les lignées cellulaires | 20 mL, 5 x 20 mL, 100 mL)
Veuillez noter que le flacon de 120 mL (BB01) n’est plus disponible et a été remplacé par le nouveau flacon de 100 mL (BB05). |
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Bambanker™ Direct (pour les cellules d’hybridomes | 20 mL) |
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Bambanker™ DMSO Free (pour les cellules à haute sensibilité | 20 mL) |
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Bambanker™ hRM (pour les cellules ES et iPS | 20 mL, 100 mL)
Veuillez noter que le flacon de 120 mL (BBH03) n’est plus disponible et a été remplacé par le nouveau flacon de 100 mL (BBH04). |
Applications
BambankerTM prévient les différenciations non désirées
Viabilité cellulaire et coloration ALP de cellules souches pluripotentes. Rangée supérieure : un grand nombre de cellules sont détectées deux jours après la décongélation. Les cellules ne montrent aucun changement morphologique après décongélation. Rangée inférieure : BambankerTM ne provoque pas de différenciation cellulaire car toutes les cellules souches congelées produisent encore des taux élevés de phosphatase alcaline, un marqueur pour les cellules souches pluripotentes.
Comparaison de BambankerTM avec un autre milieu de cryoconservation pour la culture de 1400 lignées cellulaires différentes
La banque de cellules JCRB gère environ 1 400 lignées cellulaires différentes. Un faible taux de survie après décongélation de lignées cellulaires congelées (KHYG-1, KAI3, HL60, OVMANA) leur a permis de tester BambankerTM et de le comparer au milieu de cryoconservation utilisé jusqu’à présent pour les quatre lignées cellulaires. Le taux de croissance après décongélation a été comparé pour les cellules stockées avec le milieu de cryoconservation utilisé et BambankerTM.
Toutes les cellules cultivées ont été récoltées en phase de croissance logarithmique. 1 ml de milieu de cryoconservation a été ajouté à environ 1 x 106 cellules dans un cryotube. Les cellules ont été stockées pendant 2 semaines à -80 °C. Les cellules ont été décongelées dans un bain-marie à 37 °C et incubées à 37 °C et 5% de CO2 dans une plaque 96 puits. Chaque jour, le nombre de cellules viables a été déterminé.
Le taux de survie après décongélation des quatre lignées cellulaires (KHYG-1, HL60, KAI3, OVMANA) est très bas avec le produit actuellement disponible dans le commerce et Bambanker ™. Cependant, après décongélation, Bambanker ™ a amélioré la prolifération cellulaire des quatre lignées cellulaires par rapport au produit commercial actuellement utilisé.
→ La banque de cellules JCRB utilise BambankerTM depuis 2014 pour toutes ses lignées cellulaires.
→ Télécharger ici AppNote pour plus d’informations
Qualité BPF (GMP)
Tous les produits de la série Bambanker sont fabriqués dans des installations conformes aux bonnes pratiques de fabrication actuelles (BPF).
Les produits sont soumis à un système de gestion qualité de haut niveau, qui assure la cohérence, la fiabilité et la qualité supérieure sur lesquelles vous pouvez compter.
Notes du constructeur
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Compatibilité et Références
Compatibilité – Cellules congelées avec succès
La banque de cellules JCRB stocke avec succès plus de 1 400 lignées cellulaires différentes avec Bambanker™.
Références
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- Hikichi, T. et al. Differentiation potential of parthenogenetic embryonic stem cells is improved by nuclear transfer. Stem Cells 25, 46–53 (2007).
- Huang, Y. H., Yang, J. C., Wang, C. W. & Lee, S. Y. Dental Stem Cells and Tooth Banking for Regenerative Medicine. J. Exp. Clin. Med. 2, 111–117 (2010).
- Lechner, S. M. Interaktionen von Inseminatbestandteilen mit Epithelzellen und Leukozyten im Uterus des Rindes. (2008).
- Liu, D. et al. Relation between human decay-accelerating factor (hDAF) expression in pig cells and inhibition of human serum anti-pig cytotoxicity: Value of highly expressed hDAF for xenotransplantation. Xenotransplantation 14, 67–73 (2007).
- Mieno, S. et al. Effects of diabetes mellitus on VEGF-induced proliferation response in bone marrow derived endothelial progenitor cells. J. Card. Surg. 25, 618–625 (2010).
- Mieno, S. et al. Characteristics and Function of Cryopreserved Bone Marrow-Derived Endothelial Progenitor Cells. Ann. Thorac. Surg. 85, 1361–1366 (2008).
- Naito, H. et al. The advantages of three-dimensional culture in a collagen hydrogel for stem cell differentiation. J. Biomed. Mater. Res. – Part A 101, 2838–2845 (2013).
- Shimizu, Y. et al. Impaired tax-specific t-cell responses with insufficient control of HTLV-1 in a subgroup of individuals at asymptomatic and smoldering stages. Cancer Sci. 100, 481–489 (2009).
- Takata, Y. et al. Generation of iPS Cells Using a BacMam Multigene Expression System. Cell Struct. Funct. 36, 209–222 (2011).
- Tamai, Y. et al. Potential contribution of a novel Tax epitope-specific CD4+ T cells to graft-versus-Tax effect in adult T cell leukemia patients after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. J. Immunol. 190, 4382–92 (2013).
- Zaidi, S. K. et al. Runx2 deficiency and defective subnuclear targeting bypass senescence to promote immortalization and tumorigenic potential. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 104, 19861–19866 (2007).
Seuls les clients connectés peuvent laisser un avis.
Dr. Moretti, VivaBioCell in Udine, Italy –
We had the opportunity to test the product with a test 1 month after freezing and I must say that we were pretty satisfied with the performance obtained. We are definitely thinking of equipping ourselves with the Bambanker as an alternative to our current freezing and cryopreservation procedures.
Utilisateur vérifié
Dr.ssa Alessandra Leone, IZSAM, Department of Virology and Cell Cultures, Italy –
Translation by NIPPON Genetics EUROPE:
We have been using the Bambanker for several years, and with extreme satisfaction, to freeze our monolayer cell lines. We use it for several cell lines (BHK21, VERO, MDBK, TURB BOV…) and also for other cell lines more susceptible to freezing such as for example a primary line made in our laboratory. With the Bambanker we freeze at different temperatures, below -80°C and in nitrogen, and we have experienced greater recovery in less time than our previous freezing medium. We are very satisfied and will continue to use it.
Utilisateur vérifié
es –
Wir nutzen Bambanker seit einiger Zeit als Standardeinfriermedium für verschiedene Zelltypen: Tumorzelllinien, Hybridomzellen, Primärzellen (PBMCs). Es funktioniert für alle Zelltypen sehr gut und zuverlässig und vereinfacht viele Abläufe bei uns. Außerdem wird der internationale Versand enorm vereinfacht, da kein Serum enthalten ist und trotzdem, auch bei längeren Laufzeiten und Aufenthalt im Zoll, auf Trockeneis transportiert werden kann. Auch die Lagerung bei -80°C funktioniert gut und erleichtert vieles.
Translation by NIPPON Genetics EUROPE:
We have been using Bambanker as a standard freezing medium for various cell types for some time: Tumour cell lines, hybridoma cells, primary cells (PBMCs). It works very well and reliably for all cell types and simplifies many procedures for us. It also simplifies international shipping enormously, as it does not contain any serum and can still be transported on dry ice, even with longer transit times and stays in customs. Storage at -80°C also works well and simplifies many things.
Utilisateur vérifié
Dr Sandra Hoffmann, Institut für Humangenetik, Universität Heidelberg –
Mit der Verwendung des Bambaker Einfriermediums konnten wir den prozentualen Anteil überlebender iPS-Zellen nach dem Auftauen wesentlich erhöhen. Wir sind mit diesem Produkt überaus zufrieden und verwenden es mittlerweile für alle Stammzellkulturen.
Translation by NIPPON Genetics EUROPE:
By using the Bambaker freezing medium, we were able to increase significantly the percentage of surviving iPS cells after thawing. We are very satisfied with this product and now we use it for all our stem cell cultures.
Utilisateur vérifié
Dr. Maria Wiese, University Medical Center Göttingen (UMG) –
Since many years we are working with primary cell cultures derived from high-grade brain tumors which are highly susceptible to environmental changes and differing culture conditions. Thus, freezing and thawing is a challenging process for these cells. According to our experiences, we could not avoid to lose 30% to 40% of living cells after each freezing/thawing cycle. In addition, the cells need a recovery time of at least five days after freezing in our previous freezing medium, obtained from other manufacturers. We’ve recently tested the Bambanker medium with striking results: recovery times of only two days of 80% of living and “healthy” cells. We observed this improvement of recovery time and proportion of living cells with all four cell lines, that we’ve tested so far. We are very satisfied with Bambanker and will continue to use it.
Translation by NIPPON Genetics EUROPE:
Wir arbeiten seit vielen Jahren mit primären Zellkulturen, die aus weitfortgeschrittenen Gehirntumoren gewonnen werden. Diese Zellen reagieren sehr empfindlich auf Umweltveränderungen und sich ändernde Kulturbedingungen. Das Einfrieren und Auftauen wird damit zu einem schwierigen Prozess für diese Zellen. Unseren Erfahrungen nach können wir einen Verlust von 30 % bis 40 % der lebenden Zellen nach jedem Einfrieren/Auftauen Zyklus nicht vermeiden. Zusätzlich benötigen die Zellen nach dem Einfrieren in unserem vorherigen Medium eines anderen Herstellers eine Erholzeit von mindestens fünf Tagen. Kürzlich haben wir das Bambanker Medium mit faszinierenden Resultaten getestet: Erholzeiten von nur zwei Tagen von 80 % der lebenden und “gesunden” Zellen. Wir konnten diese Verbesserung der Erholzeit und die Proportion von lebenden Zellen bei allen vier Zelllinien, die wir bisher getestet haben, beobachten. Wir sind sehr zufrieden mit Bambanker und werden es weiterhin benutzen.
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Dr. Arihiro Ohara of National Institute of Biomedical Laboratories JCRB cell bank –
JCRB cell bank has carried out cell bank business for 30 years and we currently store 1400 types of cell lines. In 2013, we offered about 4,300 ampules for a fee to domestic and foreign researchers. Due to the high number and the wide variety of cell lines, we had some problems.
Thus some users complained that their cell lines of dying after thawing, resulting in unsuccessful cultivation. Especially four types of cell lines were a problem which had to be urgently improved. Therefore, we compared Bambanker™ with our currently used commercial preservation medium in a cryopreservation test. The cell lines, which were stored with Bambanker™, showed much higher cell proliferation than cells, which were stored with our currently used commercially available product. Surprisingly, with Bambanker™ we got for all four cell lines very reproducible results.
In addition, Bambanker has no differences between the lots since it does not contain serum. We are very grateful for that because it strongly simplifies the delivery procedure overseas. In the future, we will completely change to Bambanker™ in order to improve the survival rate and growth of our cells. We are thankful for resolving that long-standing problem and recommend Bambanker™ to all domestic researchers and foreign cell banks.
This data will be also described at our JCRB website. In the near future we plan to test Bambanker™ for human tissue-derived and human iPS cell lines.
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